X33酵母感受態細胞

簡要描述：X33酵母感受態細胞保存條件：-80℃，酵母促轉化劑：100μl -20℃，畢赤酵母轉化液：5ml，4℃。

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Cassification

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X33酵母感受態細胞操作說明：

1、取需轉化質粒5µg，酶切，回收；

2、取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的線性質粒1-5µg（體積不高于15µl），酵母促轉化劑10µl，100µl冰上融化的感受態細胞，畢赤酵母轉化液500µl，輕輕翻轉混勻6-8次；

3、30℃水浴30min，每15min輕輕翻轉混勻6-8次；

4、每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉化效率，也可不做）

5、42℃水浴15min，每7.5min輕輕翻轉混勻6-8次；

6、12000rpm瞬時離心棄上清，每支加1ml的YPGPlus（或YPG）于30℃復蘇1h；（用于提高轉化效率，也可不做）

7、12000rpm瞬時離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養3-7d。

X33酵母感受態細胞注意事項：

1、使用酵母促轉化劑前，請把裝有酵母促轉化劑的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲存備用。

2、轉化液低溫環境下會析出，請于常溫下溶解后使用。

3、轉化全程要無菌操作。

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