一、什么是密度梯度？

　　密度梯度是指在液體介質(zhì)中，密度從上到下或從一側(cè)到另一側(cè)呈連續(xù)或階梯式變化的分布狀態(tài)。在離心過程中，不同密度的顆粒會根據(jù)其自身的密度“沉降”或“漂浮”到與其密度相等的液層中，從而實現(xiàn)分離。這種基于密度差異的分離方法被稱為“密度梯度離心”，是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)中常用的分離技術(shù)之一。

　　樣本密度分離液正是通過在離心管中形成穩(wěn)定的密度梯度，使得混合樣本中的不同組分在離心力作用下遷移到各自等密度區(qū)域，從而實現(xiàn)高效、高純度的分離。

　　二、密度梯度的形成方式

　　密度梯度的形成主要有兩種方式：連續(xù)梯度和不連續(xù)梯度。

　　. 連續(xù)密度梯度：在整個離心管中，密度從頂部到底部呈平滑、連續(xù)的變化。這種梯度通常通過梯度混合器制備，適用于需要精細(xì)分離多種密度相近顆粒的情況。

　　. 不連續(xù)密度梯度：由兩層或多層不同密度的液體疊加而成，形成明顯的界面。樣本加在上層，離心后顆粒根據(jù)其密度停留在相應(yīng)的界面處。這種方法操作簡便，常用于外周血單個核細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞等的快速分離。

　　三、密度梯度分離的基本原理

　　密度梯度分離依賴于離心力和浮力的共同作用。當(dāng)樣本在密度梯度液中離心時，顆粒會受到三個力的作用：

　　1.離心力：推動顆粒向管底沉降；

　　2.浮力：由周圍液體提供的向上推力；

　　3.摩擦力：與顆粒運動方向相反的阻力。

　　當(dāng)顆粒的密度大于周圍液體時，它會繼續(xù)下沉；當(dāng)密度小于液體時，則會上浮。顆粒會停留在與其自身密度相等的液層中，達(dá)到“等密度點”，實現(xiàn)分離。這一過程不依賴于顆粒的大小或形狀，而是主要取決于其浮力密度，因此具有較高的特異性。

　　四、為了獲得較好的分離效果，實驗者應(yīng)注意以下幾點：

　　樣本處理：血液樣本應(yīng)避免溶血，組織樣本需充分勻漿并過濾，以減少雜質(zhì)干擾。

　　離心參數(shù)：轉(zhuǎn)速、時間和溫度需根據(jù)分離液類型和目標(biāo)顆粒進(jìn)行優(yōu)化。

　　梯度制備：使用移液器緩慢加入各層液體，避免擾動界面；可使用梯度混合器制備連續(xù)梯度。

　　收集與清洗：分離后應(yīng)小心吸取目標(biāo)層，避免混入鄰近層，并用緩沖液洗滌去除殘留分離液。

　　密度梯度是樣本密度分離液的核心技術(shù)，它通過精確調(diào)控液體密度分布，實現(xiàn)了對復(fù)雜生物樣本中不同組分的高效分離。通過合理選擇梯度液類型、濃度及優(yōu)化離心條件，能夠有效提高分離的精度與效率。